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海南飞鱼彩票复式投注:論文解讀--海豚鏈球菌SagH基因DNA疫苗的構建及特性研究

出處:公眾號水生動物健康評估 作者:陳國權 水產養殖網 2019-11-06 10:42:00

今天和大家分享一篇來自Fish and Shellfish Immunology的文章:海豚鏈球菌SagH基因DNA疫苗的構建及特性研究,引用信息如下:
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海豚鏈球菌是一種危害較大的水產養殖病原菌,鏈球菌溶血素s是海豚鏈球菌的一種重要的致病因子。本研究,作者以牙鲆(比目魚)為研究對象,構建了一種基于鏈球菌溶血素s相關基因簇SagH基因的DNA疫苗,結果如下:

一、pSagH疫苗在魚體表達情況

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用pSagH、PCN3或PBS對牙鲆進行了免疫接種。經PCR和RT-PCR檢測,pSagH注射魚的脾、肌肉和腎臟中均檢測到質粒DNA和SagH轉錄物。相比之下,在PCN或PBS接種的魚類中未檢測到SagH轉錄情況。為了檢測SagH蛋白在接種魚中的表達,作者進行了免疫膠體金電鏡分析,結果顯示SagH蛋白在接種pSagH的魚的肌肉組織中產生,而在PCN3的魚或PBS的魚中沒有產生。

二、pSagH疫苗對頭腎巨噬細胞呼吸爆發活性的影響

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呼吸爆發活性表明,與PCN3或PBS免疫組相比,pSagH免疫組的巨噬細胞在接種后第4、7和14天呼吸爆發活性顯著增強(p<0.05)。

三、免疫魚血清抗體的產生

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用pSagH免疫的魚血清中含有抗該蛋白的抗體。特異性血清抗體與rSagH2(重組SagH2)在2周時出現,并持續至至少8周。此外,最大血清效價在接種后4周時發生。PCN3和PBS免疫的魚未檢測到特異性血清抗體的產生。

四、pSagH疫苗免疫?;ぢ?br>
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接種pSagH的魚在1~2個月后,用海豚鏈球菌SF1或29177對其進行感染,并監測15天的死亡率。當在接種后一個月用海豚鏈球菌SF1感染時,接種pSagH、PCN3和PBS的魚平均累積死亡率分別為6.0%、76.0%和82.0%。當在接種后兩個月用海豚鏈球菌SF1感染時,接種pSagH、PCN3和PBS的魚平均累積死亡率分別為8.0%、80.0%和86.0%。在接種一個月后和兩個月后,pSagH免疫魚的相對存活率分別為92.62%和90.58%。為了檢驗對海豚鏈球菌29177的交叉?;ぷ饔?,在接種一個月后用海豚鏈球菌29177攻擊接種過的魚,結果表明,pSagH、PCN3和PBS接種過的魚平均累積死亡率分別為12.0%、66.0%和70.0%。在2個月時,接種pSagH、PCN3和PBS的魚平均累積死亡率分別為14.0%、68.0%和72.0%。因此,在接種1個月和2個月后,接種的用海豚鏈球菌29177感染接種過pSagH的魚的相對存活率分別為83.01%和80.65%。

五、免疫基因在魚體內的表達

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采用qRT-PCR方法檢測pSagH誘導的免疫相關基因的表達。與接種PCN3相比,接種pSagH疫苗魚體白細胞介素1β(IL-1β)、白細胞介素2(IL-2)、白細胞介素6(IL-6)、白細胞介素8(IL-8)、白細胞介素10(IL-10)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)、干擾素γ(IFN-γ),干擾素誘導的Mx蛋白(Mx)、NK細胞增強因子(NKEF)、轉化生長因子β(TGFβ)、補體C3、免疫球蛋白M(IgM)、D(IgD)和T(IgT)、組織相容性復合物(MHC)Ⅰ類α和Ⅱ類α、CD40和CD8α顯著(p<0.01或p<0.05)上調。

小結:
用免疫組化方法檢測pSagH(DNA疫苗)免疫后魚組織中SagH的轉錄和蛋白表達情況。后期的免疫?;ぷ饔帽礱?,1個月和2個月接種DNA疫苗的魚對i型鏈球菌的相對存活率分別為92.62%和90.58%。此外,接種DNA疫苗后對Ⅱ型鏈球菌有很強的交叉?;ぷ饔?,1個月和2個月后的相對存活率分別為83.01%和80.65%。與對照組相比,接種DNA疫苗后的魚能誘導更強的呼吸爆發活動,特異性抗體效價更高。qPCR結果表明,一些可能參與先天性和適應性免疫應答的免疫基因的表達上調。這些結果表明,pSagH是一種可用于水產養殖中抗牙鲆i型和ii型鏈球菌感染的候選DNA疫苗。

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